［文献解读］靶向肿瘤KRAS突变的过继性T细胞治疗

T-Cell Transfer Therapy Targeting Mutant KRAS in Cancer
N Engl J Med, Dec 8, 2016;375:2255-62. IF: 59.558

概述

本研究从转移性结直肠癌患者的肿瘤浸润淋巴细胞（tumor-infiltratinglymphocytes，TILs）中，分离得到对KRAS G12D突变产生响应的CD8+T细胞多克隆。该CD8+T细胞多克隆包含有4种靶向KRAS G12D突变的T细胞亚型，全部具有HLA-C*08:02限制性，将1.11×1011个此种T细胞回输后，患者体内7个肺部转移灶全部发生消退。但是，其中一个转移灶在治疗后9个月进展，实施了手术切除；经全外显子和转录组测序发现该转移灶6号染色体发生单倍体缺失，正是编码HLA-C*08:02型 MHC I类分子的区域。 而HLA-C*08:02型MHC I类分子的缺失，为肿瘤免疫逃逸提供了一条直接的途径。总结：对于表达KRAS G12D突变和HLA-C*08:02的肿瘤，回输靶向突变型KRAS的CD8+ T细胞可以有效地治疗肿瘤。

亮点

从TILs中分离得到特异性地靶向KRAS G12D突变的CD8+ T细胞多克隆，并利用TCR免疫组库技术对效应T细胞克隆的进行监测和追踪。

意义

首次靶向KRAS突变、成功地实施过继性细胞转移治疗，并取得很好的疗效，使得无药可用的KRAS突变有药可救。

背景

1.首次靶向KRAS突变、成功地实施过继性细胞转移治疗，并取得很好的疗效，使得无药可用的KRAS突变有药可救。过继性细胞治疗在临床应用的前景很好，其中最为关键的是T细胞能否响应肿瘤突变产生的新抗原决定表位（neoepitope），决定了患者免疫能否从细胞免疫治疗（甚至免疫检查点抑制剂治疗）中受益。 2.KRAS突变：癌基因KRAS的突变频率很高，并且发挥促进肿瘤发生发展的作用；其中大部分是热点驱动突变，如12、13、61号密码子，12号密码子突变频率最高，为G到D的转变，称之为KRAS G12D。KRAS G12D是消化道肿瘤中最高频的突变，约45%的胰腺癌和13%的结直肠癌中存在。

3.经数十年的研究，目前仍然没有药物或疫苗能够有效地靶向人类KRAS突变。

Case report

患者：

50岁，女性，转移性结直肠癌

治疗方案：

•细胞回输前，接受非清髓性淋巴细胞清除化疗方案：环磷酰胺60mg/kg体重，2天；随后氟达拉滨25mg/m2体表面积，5天。

•患者接受单次回输1.48×1011 个体外扩增的TILs，其中包含约75% CD8+ T细胞1.11×1011个对KRAS G12D突变有响应，未检测到对患者其它突变的响应。该细胞制品的主体产生多种效应细胞因子（INFγ、TNF、IL-2），并表现出细胞杀伤能力（图A）。

•细胞回输治疗后，患者接受5次的IL-2输入 (720,000 IU/kg体重)。

治疗效果：治疗后40天第1次随访时，7个肺转移灶均消退；维持9个月部分有效（PR）后，有1个转移灶发生进展（lesion 3）；经手术切除，患者目前已持续4个月临床无病状态。

细胞制备——分离TILs中识别KRAS突变的T细胞

鉴定出对KRAS G12D响应的TILs——TIL #6，将其在体外扩增2周后，用于回输治疗。

TCR组库检测——体内追踪KRAS突变特异性T细胞克隆

1. 从扩增前的TIL #6中，分离出占主体地位的KRAS G12D特异性T细胞克隆——TRBV5-6（A）克隆。

2.从回输后40天的患者外周血中，分离出2种的KRAS G12D特异性T细胞克隆——TRBV5-6（B）和TRBV5-6（C） 。

3.从TIL #5中，分离出另一个KRAS G12D特异性T细胞克隆——TRBV10-2克隆

1.回输前1周采集的患者外周血中，4种克隆均未检出 (frequency,<0.0002%)；

2.回输治疗40天后的患者外周血中，回输细胞中比率最高的TRBV5-6(A)没有检测到，其它克隆均能检测到；

3.回输治疗90天后的患者外周血中，剩余3种克隆的频率维持在10.4%、4.5%、0.005%，TRBV10-02排名最高。

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接［文献解读］靶向肿瘤KRAS突变的过继性T细胞治疗
评价KRAS G12D T细胞受体的特异性和敏感性

1.在自体外周血T细胞中，表达4种响应KRAS G12D突变的TCR。

2.4种TCR中的3种响应9个氨基酸的KRAS G12D肽段（G12D-9mer），另1种只对G12D-10mer的KRASG12D肽段响应，对野生型KRAS均无响应，呈现较好的特异性。

3.将KRAS多肽以10倍的浓度梯度冲击PBMC，1-10nM冲击的PBMC即可被4种TCR识别，敏感性较好。

4.人胰腺癌细胞系MDA和HP在同时表达KRAS G12D突变和HLA-C*08:02时，也可以被4种TCR受体识别。

KRAS G12D 特异性T细胞的功能

回输细胞中的4种KRAS G12D特异性T细胞克隆，其中持续存在的频率最高的为识别10mer多态的T细胞克隆，流式细胞术鉴定其组成，发现该T细胞克隆中存在较高比例的CD28+、CD57+、以及记忆T细胞（CD45RO+CD62L+）。

遗传学分析进展的转移灶（lesion 3）

进展的转移灶（lesion3）中依然表达突变的KRAS G12D。

进展的转移灶（lesion3）6号染色体存在杂合性缺失，编码HLA-C*08:02的等位基因缺失，使得KRAS G12D不能被T细胞识别，肿瘤细胞免疫逃逸。

免疫逃逸的机制

A.肿瘤细胞内抗原处理和递呈的过程：

   野生型和突变型KRAS蛋白经蛋白酶体降解产生的多肽，经由内质网-高尔基体与HLA分子结合后，运送到细胞膜上；HLA通过结合了野生型或突变型KRAS多

   肽形成了供T细胞识别的“条码”。

B.肿瘤细胞通过HLA-C等位基因递呈突变型KRAS多肽：

   肿瘤细胞内的蛋白质组由HLA-A、B、C来递呈，HLA基因为共显性基因，从父母双方共同继承，KRAS G12D突变的多肽仅与父亲或母亲一方来源的   

   HLA-C*08:02合，递呈到细胞膜上，作为T细胞识别的“条码”。

C.细胞杀伤性T细胞特异性地杀死具有KRAS G12D条码的肿瘤细胞。

D.发展出单亲二倍体的肿瘤细胞没有能够递呈KRAS G12D多肽的HLA分子，不能被T细胞识别和杀死，免疫逃逸。

n engl j medDecember 8, 2016, 375;23

讨论

1.KRAS G12D是胰腺癌（45%）和结直肠癌（13%）患者中频率最高的突变，而美国人群约有8%的白种人和11%的黑种人表达HLA-C*08:02，也就是说仅美国每年就有几千名患者可能从靶向KRAS G12D突变的T细胞治疗中受益。

2.HLA基因位的杂合性缺失在肿瘤中经常发生，这将是提高免疫治疗效果所要必须克服的一个难题。靶向由肿瘤中存留的MHC I类分子递呈的抗原、挖掘CD4+T细胞或者固有免疫系统的作用，或许值得探索。

3.Carl H. June,MD对这项工作盛赞的同时，也提出建议：考察其它能够递KRAS突变的HLA类型，以扩大适用人群；人工设计合成的TCR，去广泛地识别各种HLA分子 递呈的KRAS突变。

4.TCR组库检测的作用：对真正发挥效应的特异性T细胞克隆进行甄别和监测。

展望：未来肿瘤精准医疗的治疗流程

免疫治疗的比重将大大增加！！

Trends Pharmacol Sci. 2017 Jan;38(1):15-24

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这里哪里有临床哦？

看不懂啊。

donglei 发表于 2017-2-13 09:48
接［文献解读］靶向肿瘤KRAS突变的过继性T细胞治疗
评价KRAS G12D T细胞受体的特异性和敏感性

感谢分享

感谢，有具体的临床或实验信息么？

billhf 发表于 2017-2-14 17:28
感谢，有具体的临床或实验信息么？

附件中文献原文中有更为具体信息，下载没有设置权限，可以下载阅读，希望对你有帮助。